Tecnología del DNA recombinante Fermentaciones Industriales por Hector Massaguer

Se conoce como tecnología del DNA recombinante al conjunto de técnicas que permiten la manipulación de los genes como unidades bioquímicas e incluye técnicas como:

♦ Recombinación in vitro
♦ Clonación génica
♦ Manipulación génica
♦ Ingeniería genética

Permiten la introducción de secuencias específicas de DNA en organismos procariotas o eucariotas y la posterior replicación y expresión de estas secuencias para llevar a cabo la información codificada en estas secuencias. Seguimos un protocolo, como se ve a continuación:

1. Aislamiento de la secuencia de DNA de interés para su clonación posterior
2. Incorporación de la secuencia de DNA aislada en un vector
Los plásmidos son elementos genéticos:
o Circulares, por lo que están protegidos contra las endonucleasas.
o Pequeños, por lo que pueden ser transferidos fácilmente.
o Tienen un origen de replicación, por lo que se pueden replicar en el huésped.
o Pueden codificar para numerosas funciones celulares, como resistencias o la capacidad de conjugar con otros organismos.
Dependiendo de lo que quieras hacer con el DNA aislado, lo insertarás en uno u otro tipo de vector, ya que existen diferentes tipos de vectores, como:
o De clonación
o De secuenciación
o De expresión

La introducción del DNA exógeno al plásmido se hace de diferente manera, en función de si al cortar con los enzimas de restricción se generan extremos romos o cohesivos. Si se generan extremos romos, los extremos 5’ se digerirán con una exonucleasa, mientras que los 3’ se elongarán mediante una transferasa terminal, con ATP o TTP, generando una cola de poliA o poliT. Se podrán unir entonces y formar el plásmido deseado. En el caso de que se generen extremos cohesivos, cortaremos con dos diferentes enzimas, de manera que el inserto se insertará en la dirección deseada en el plásmido.

3. Incorporación del vector con el DNA insertado en la célula huésped
4. Selección de los huéspedes que hayan incorporado el vector
o La presencia del vector recombinado
o La presencia del DNA exógeno
o Detección indirecta del DNA por expresión de la proteína