Fluorophos Prueba sencilla para la determinación de una correcta Pasteurización
Fue reconocido ya por el año 1930 que la fosfatasa alcalina (ALP), una enzima presente naturalmente en todo tipo de leche, es inactiva en condiciones de temperatura ambiente ligeramente más altas que las que se requieren para matar el Mycobacterium tuberculosis y la mayoría de los demás patógenos presentes en la leche (71.7ºC/15 segundos).
Estas condiciones se utilizan comercialmente para pasteurizar la leche (pasteurización HTST). Se han desarrollado los métodos de prueba basados en medición de ALP a fin de demostrar que la leche ha sido correctamente pasteurizada.
Las pruebas desarrolladas para la medición de ALP en los años 1930 y usadas durante varios años estaban basadas en métodos de análisis por colorimetría, los cuales eran sólo semi-cuantitativos y relativamente insensibles con un límite de detección de alrededor del 0.1% en leche cruda.
En 1990 Rocco1 publicó los resultados de una prueba colaborativa de un método fluorimétrico, el cual era lineal por encima de un amplio rango de valores de ALP, cuantitativo, preciso y sensible en niveles por debajo de 0.01% en leche cruda. El método, llamado Fluorophos® ALP, ha sido desarrollado y comercializado por Advanced Instruments, Inc., USA.
En un número de estudios se ha comparado el Fluorophos con otros métodos existentes menos sensibles de referencia por colorimetría y se ha establecido una relación de alrededor del 0.1% como punto límite en leche cruda.
Lechner2 estudió el método Fluorophos utilizando leche de vaca en Alemania.
Langridge3 resumió los resultados de un estudio que involucró a 22 laboratorios que probaron Fluorophos, Aschaffenburg Mullen y el método de referencia por colorimetría que se utilizaba por aquel entonces en la UE. Sigue a continuación una comparación entre los métodos Fluorophos y colorimetría UE en base a los resultados de muestras ciegas por duplicado.
En los estudios arriba mencionados se comprobó un valor de Fluorophos de 500mU/l a fin de precisar la presencia de leche no-pasteurizada en el punto límite establecido (alrededor de 0.1% en leche cruda).
Sin embargo, un estudio donde se utilizaba leche de origen francés arrojó diferentes valores para 0.1% de leche cruda:
Al realizar las comparaciones con métodos de colorimetría se menciona a la variabilidad de métodos como la principal razón para la falta de consenso.
Cambios introducidos a las pruebas de ALP testing dentro de la Unión Europea
En mayo de 2007 la UE aprobó el método de fluorimetría como método de referencia para la fosfatasa alcalina, requiriendo que cualquier método a considerarse para su uso debería validarse contra el valor de 500 a 350mU/l establecido para ALP en leche.
Comparación entre Flourophos y otros métodos de testeo
Estudios profesionales llevados a cabo por una empresa independiente en el Reino Unido han mostrado una considerable preferencia a favor del Fluorophos y Charm como métodos para determinación de actividad de ALP.
Comparación entre los valores medios obtenidos entre las mismas muestras testeadas bajo el “Proficiency Testing Scheme” de Control de Calidad
El método de referencia de laboratorio de la UE (afssa, Paris, France) comparado con el Charm (NovaLum) y el Fluorophos y también se muestra que el Charm está positivamente inclinado en la comparativa con el Fluorophos. (ver cuadro abajo)
Scintu et al.4 ha comparado el método de la UE con el Fluorophos para leche de oveja y se mostró que los valores R y r son cercanos a aquellos mencionados para la leche vacuna.
Las pruebas desarrolladas para la medición de ALP en los años 1930 y usadas durante varios años estaban basadas en métodos de análisis por colorimetría, los cuales eran sólo semi-cuantitativos y relativamente insensibles con un límite de detección de alrededor del 0.1% en leche cruda.
En 1990 Rocco1 publicó los resultados de una prueba colaborativa de un método fluorimétrico, el cual era lineal por encima de un amplio rango de valores de ALP, cuantitativo, preciso y sensible en niveles por debajo de 0.01% en leche cruda. El método, llamado Fluorophos® ALP, ha sido desarrollado y comercializado por Advanced Instruments, Inc., USA.
En un número de estudios se ha comparado el Fluorophos con otros métodos existentes menos sensibles de referencia por colorimetría y se ha establecido una relación de alrededor del 0.1% como punto límite en leche cruda.
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| Tabla 1: Determinación de ALP por AOAC y estudio comparativo Fluorophos (Rocco1) utilizando leche de vaca en los EEUU |
Lechner2 estudió el método Fluorophos utilizando leche de vaca en Alemania.
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| Tabla 2: Estudio de Lechner |
Langridge3 resumió los resultados de un estudio que involucró a 22 laboratorios que probaron Fluorophos, Aschaffenburg Mullen y el método de referencia por colorimetría que se utilizaba por aquel entonces en la UE. Sigue a continuación una comparación entre los métodos Fluorophos y colorimetría UE en base a los resultados de muestras ciegas por duplicado.
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| Tabla 3: Comparación entre método UE (referencia) y Fluorophos (Langridge) utilizando leche vacuna provista en el Reino Unido |
En los estudios arriba mencionados se comprobó un valor de Fluorophos de 500mU/l a fin de precisar la presencia de leche no-pasteurizada en el punto límite establecido (alrededor de 0.1% en leche cruda).
Sin embargo, un estudio donde se utilizaba leche de origen francés arrojó diferentes valores para 0.1% de leche cruda:
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| Tabla 4: Octubre de 2005 estudio por método UE de referencia en laboratorio (afssa) |
Al realizar las comparaciones con métodos de colorimetría se menciona a la variabilidad de métodos como la principal razón para la falta de consenso.
Cambios introducidos a las pruebas de ALP testing dentro de la Unión Europea
En mayo de 2007 la UE aprobó el método de fluorimetría como método de referencia para la fosfatasa alcalina, requiriendo que cualquier método a considerarse para su uso debería validarse contra el valor de 500 a 350mU/l establecido para ALP en leche.
Comparación entre Flourophos y otros métodos de testeo
Estudios profesionales llevados a cabo por una empresa independiente en el Reino Unido han mostrado una considerable preferencia a favor del Fluorophos y Charm como métodos para determinación de actividad de ALP.
Comparación entre los valores medios obtenidos entre las mismas muestras testeadas bajo el “Proficiency Testing Scheme” de Control de Calidad
El método de referencia de laboratorio de la UE (afssa, Paris, France) comparado con el Charm (NovaLum) y el Fluorophos y también se muestra que el Charm está positivamente inclinado en la comparativa con el Fluorophos. (ver cuadro abajo)
Scintu et al.4 ha comparado el método de la UE con el Fluorophos para leche de oveja y se mostró que los valores R y r son cercanos a aquellos mencionados para la leche vacuna.
Referencias
1. Rocco; J.ASSOC. OFF. ANAL. CHEM. Vol. 73 No 6. 1990
2. Lechner & Ostertag Deutche Milchwirtschaft 23 (1146 – 1149) 1993
3. Langridge International Food Hygiene 10 (3) 31-33 1999)
4. Scintu et al (J Food Protection, Vl63. No 9, 2000 Páginas 1258-1261)
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