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Pipetas Automáticas Buen uso y cuidado
Buenas Prácticas de Laboratorio

Las pipetas son instrumentos de precisión usados a diario en el trabajo de rutina de laboratorio y a veces en aplicaciones más complejas.

Necesitan ser revisadas y calibradas regularmente para asegurar su funcionamiento en los niveles más altos.

De acuerdo a la norma ISO 8655, se recomienda hacer ajuste, limpieza, sustitución de partes gastadas, mantenimiento y calibración cada 6 meses o al menos 1 vez al año.

Técnicas de buen uso de las pipetas
Lo primero a verificar al inicio del trabajo es que la mesada esté ordenada y los elementos cerca, evitando así tener que salir de un laboratorio a otro a buscarlos en mitad del análisis, es decir que organizar el lugar de trabajo es el primer paso para lograr la máxima eficiencia.

Respecto a la pipeta misma, lo primero es asegurarse que la punta está bien colocada y encaje perfectamente antes de establecer el volumen.
Al setear el volumen de trabajo, el giro debe ser suave y no debe pasarse de los límites superior o inferior, sostener el cuerpo de la micropipeta en una mano y usar la otra mano para girar la rueda. También se puede usar el botón de volumen para ajustar fácilmente con una mano.
Siempre finalice el pipeteado girando el botón superior en sentido horario. Si se produjera un contragiro, éste siempre sería en la misma posición. Al reducir el volumen, gire suavemente la rueda hasta que aparezca en la pantalla el volumen deseado. No se exceda del volumen deseado. Al aumentar el volumen, rote la rueda aproximadamente un tercio de vuelta por sobre el volumen deseado y luego suavemente gírelo hacia el otro lado para disminuir el volumen hasta alcanzar el indicado.

Fases de pipeteado
Preparación
Sostenga el instrumento en una posición casi vertical. Presione el émbolo suavemente hasta la posición más alta primero.

Aspiración
Sumerja unos milímetros la punta de la pipeta en el líquido. Suelte con suavidad el émbolo para que se mueva hacia arriba a la posición de reposo.

Estabilización
Espere un segundo, para que todo el líquido tenga tiempo de moverse hacia arriba en la punta (ver abajo cuadro con tiempos de estabilización por modelos).

Dispensado
Coloque la punta de la pipeta en ángulo contra la pared interior del recipiente receptor. Presione el émbolo suavemente hasta la primera posición.
Purga
Espere un segundo y luego presione el émbolo a la posición de la segunda parada. Este golpe elimina cualquier resto de la muestra de la punta de la pared lateral de deslizamiento hacia arriba por la pared.

Prevención de contaminaciones frecuentes
1) Usar tips esterilizados y con filtro.
2) Esterilizar las partes de la pipeta en contacto con la muestra.
3) Cambiar tips luego de cada muestra.
4) Identificar las pipetas o dedicarlas.
5) No inclinarla demasiado.
6) Mantenerlas limpias en su lugar.

Limpieza de las pipetas
Es de vital importancia este punto de manera de evitar que los contaminantes ingresen a la muestra.

Descontaminación
Se puede realizar a través de 2 procedimientos:

• Autoclavado
"Ningún instrumento de precisión es totalmente autoclavable"
Someter la pipeta entera a 121° durante 20 minutos hace que se pierda su calibración.
Las partes autoclavables de la pipeta son el tip holder, el tip eyector y la rosca de conexión que son las únicas que están en contacto con la muestra.

• Limpieza biológica
Se realiza sin desarmarla y evitando sumergir el contador.

Se debe proceder a sumergir las pipetas en las siguientes soluciones en el orden indicado:

1) En Acido Clorhídrico 10% durante media hora. Así se realiza la llamada "limpieza catiónica".
2) Con Agua destilada durante media hora. Este es el primer enjuague con agua destilada.
3) Con Hipoclorito de Sodio (16.5%) durante media hora. Se produce así la decontaminacion biológica.
4) Luego Agua destilada durante media hora. Segundo enjuague con agua destilada.
5) Se coloca en un Baño Ultrasónico para realizar la limpieza a fondo.
6) Secar en estufa (40 – 50 ºC) aprox. 1 hora.
7) Rearmado y calibración.

Algunas consideraciones importantes

Las pipetas deben ser almacenadas siempre en posición vertical, en el rango de medición máximo y en un área limpia. Guardarlas en el soporte (No en cajones).
Limpiar bien las pipetas cuando se termina de trabajar.

Sólo trabajar entre los rangos máximos y mínimos de cada modelo.
Utilizar tips de calidad construidos en polipropileno puro que asegura un dispensado completo, sin contaminación. Recuerde siempre que la punta está en contacto directo con la muestra y puede contaminar la solución. El uso de filtros en las puntas ejerce también un efecto barrera contra los aerosoles generados durante el pipeteo. Verificar su esterilidad mediante el certificado que deben poseer en el envase.



Cómo calibrar una pipeta según la norma ISO 8655. Método Gravimetrico
Los elementos necesarios son:
• Recipientes adecuados
• Pinzas
• Agua (ISO 3696)
• Balanza de 10-6 (calibrada)

Condiciones Ambientales
Temperatura ambiente y del agua
ISO: 15 – 30 ºC +/- 0.5 ºC

Humedad relativa Ambiente
ISO: Aprox. 50%

Presión atmosférica
ISO: 1013 +/- 25 HPa (+/- 0.5 durante el test)

Determinaciones
1) Determinación de la pérdida de evaporación que ocurre durante un ciclo de pipeteado.
2) Determinación del peso individual de 10 ciclos de pipeteado.
3) Cálculo del peso medio.
4) Cálculo del volumen.
El Factor Z (uL/mg) se utiliza para las correcciones del volumen.
Se obtiene de tablas por medio de la temperatura media del agua y la presión atmosférica promedio.

5) Evaluación de la exactitud (error sistemático).
Se debe a errores de paralaje, uso incorrecto del factor de corrección (Z), pipeta descalibrada o mal ajustada en su rearmado.

6) Error relativo.

7) Evaluación de la precisión (repetibilidad).

8) Error ramdom (pipeteo impreciso).
Se debe principalmente a sellos gastados, pistones corroídos o velocidad de aspiración incorrecta.

Todos estos parámetros deben ser informados en un certificado de calibración que debe exigirse cuando se compra el instrumento.

Consecuencias más comunes por mal uso de las Pipetas (en porcentaje)
• Roturas de tip holder (40%)
• Pistones dañados (30%)
• Perdida / Goteo (15%)
• Descalibración
• Piezas metálicas corroídas

Causas que pueden llevar a esto
• Golpes
• Cambios bruscos en el seteo
• Reparaciones Incorrectas
• Autoclavado incorrecto
• Uso de solventes corrosivos
• Almacenamiento incorrecto

Conclusiones
Recuerde estos parámetros a la hora de seleccionar el instrumento de precisión que utilizará. Tenga presente que es el primer instrumento por el que atraviesa su muestra y un error en este paso provocará una baja en la calidad total del ensayo, pudiendo llegar a conducir a resultados finales parcial o totalmente incorrectos. Esto seguramente influirá negativamente en decisiones posteriores a derivarse de éstos resultados.

Fuentes de este artículo
• Procedimientos operativos standards para Manual Liquid Handling de GILSON S.A.S. (Villiers- le-bel – Francia)
• Laboratorio de Calibraciones y mantenimiento de BIO ESANCO S.A. (Capital Federal Bs. As. Argentina)


Para mayor información:
Bio Esanco SA
Tacuarí 615 (c1071AAM) Buenos Aires
Tel.: (54-11) 5237-1111
Fax: (54-11) 5236-6638
info@bioesanco.com.ar
www.bioesanco.com.ar

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