Planeación financiera Presupuestos y fuentes de financiamiento William Jiménez Lemus

La planeación como concepto, siempre la he definido de manera sencilla:

• Planear es proyectarse al futuro.


• Es intentar determinar de manera anticipada lo que esperamos acontezca a futuro, y en la que cada uno de los eventos “pensados” se debieran dar en cumplimiento de un proceso predeterminado.

En tal sentido la Planificación Financiera pretende vislumbrar los hechos económicos que se esperan en el marco de las actividades comerciales de la empresa para un periodo predeterminado.

La fundamentación de la planificación financiera se debe apoyar en los presupuestos.

Se intentarán proyectar los ingresos y los egresos de la empresa para un periodo dado, con el fin de anticiparnos a la determinación de las necesidades de dinero, para ese mismo periodo.

Por otra parte, la planeación financiera está orientada a asegurar que los recursos económicos sean utilizados en forma adecuada.

La sana gestión de toda empresa está guiada por una constante preocupación por las condiciones de empleo de su capital y de su rendimiento.

La noción de "Plan financiero" podría ir desde la simple previsión de tesorería (a un plazo más o menos largo) hasta el plan de financiación completo que abarcaría varios ejercicios.

El plan financiero se deduce, normalmente, de los planes concretos que determinan los objetivos de la actividad de compra y los medios para su consecución (planes de ventas, producción, inversiones, provisiones sobre los gastos e ingresos de explotación).

El Presupuesto de Caja es el más común y más usado. Se diseña para periodos cortos o largos, pero generalmente no superior a un año. Se intenta en él cuantificar las acciones futuras con respecto al comportamiento del dinero (Ingresos y Egresos).

Procesos

Es común y recomendable una secuencia de procesos administrativos y contables para intentar establecer unos resultados serios y confiables:

1. Proyección de las ventas y el comportamiento del flujo de caja con respecto a cómo se lleven a cabo: Contados y/o créditos.


2. Proyección de las compras necesarias para atender la demanda de nuestra clientela, para llegar a satisfacer de la mejor manera sus necesidades. Debemos registrar adecuadamente los compromisos adquiridos con el pago de las mismas, tratándose de compras de contado y/o a crédito.


3. Establecer las erogaciones necesarias por Gastos operacionales y no operacionales, necesarios para llevar a cabo nuestra actividad de empresa y la forma y periodicidad de cómo vamos a afrontar económicamente estas obligaciones.


4. Agrupar toda la información en un cuadro general resumen, que nos muestre el comportamiento mes a mes de los ingresos, los egresos y los costos y gastos necesarios para el normal funcionamiento de la empresa, con una visión final del dinero con que pudiéramos contar para iniciar cada periodo mensual.


5. Con toda la información descrita anteriormente, relacionada con las ventas, las compras, los costos y los gastos y con el resumen del comportamiento de efectivo, podemos perfectamente procesar una proyección financiera que nos permita vislumbrar que pasaría en un periodo dado a futuro, por ejemplo en seis meses o bien a un año.


6. El análisis de los “saldos mensuales” del flujo de caja, como obedece a una proyección en el tiempo, servirá de guía para determinar las necesidades de efectivo mes a mes, y las acciones que se tomarían para abastecernos del dinero necesario, recurriendo a préstamos bancarios y/o aportes extraordinarios permanentes o temporales por parte de los socios.

Así mismo, será importante hacer proyecciones sobre:

1. Los estados financieros que resultarán como consecuencia de las acciones previstas.


2. Planificar el Inventario Final, sumando a los Inventarios Iníciales las Compras y deduciendo el Costo de las Mercancías vendidas.


3. Planificar la Cuentas por Cobrar a clientes sumando las Ventas a Crédito y deduciendo las Cobranzas.


4. Planificar las Cuentas por Pagar a proveedores, sumando al saldo inicial las Compras y deduciendo los pagos proyectados.


5. Proyectar cada una de las cuentas del balance.

En tal sentido podemos preparar presupuestos fijos, en los que se da la actividad como fija y presupuestos variables en que se han previsto variaciones de la actividad de la empresa.

Uso de los pronósticos:

Los Pronósticos Financieros tienen un doble uso;

1. Permiten analizar las acciones planificadas y,


2. Controlar los resultados a medida que se van obteniendo, comparándolos con el Presupuesto, que se toma como estándar o base para esta comparación.

Necesidades y recursos:

La primera actividad deberá consistir en el establecimiento del Inventario cifrado de las necesidades para un balance dado de actividad en un período determinado.

Se trata, por tanto, de hacer, en primer término, un inventario completo de las necesidades, de modo que sea lo más verdadero posible desde estos dos puntos de vista:

Una mala apreciación del grado de disponibilidad o no disponibilidad de los fondos se reflejará como peligrosa a la hora de la ejecución de los planes, como podría ser el caso de algunos préstamos considerados como realizables y que puedan resultar no serlo en el corto o mediano plazo.

Una mala clasificación de las necesidades, podría conducirnos a decisiones con bases falseadas.

Importancia del plan financiero:

1. El plan financiero es una necesidad para toda empresa, pequeña o grande; pues muy a menudo, por un "error de tesorería", empresas rentables han fracasado o han visto trasformar su personalidad.


2. Hacer un plan financiero implica prever más allá de algunos meses y realizar elecciones. Los objetivos previstos y las elecciones decididas constituyen, finalmente, la política de la Empresa.


3. Seguir un plan financiero implica utilizar sus capitales del modo más rentable y utilizar los de los demás (banqueros y otros Prestamistas) no solo de un modo rentable, sino también económicamente, es decir, ajustando lo más posible las utilizaciones a las necesidades.


4. Finalmente, un plan financiero debe incluir las "seguridades" necesarias para hacer frente a los imprevistos inherentes a la actividad industrial o comercial.

Ventajas de los presupuestos financieros:

1. Cada una de las áreas de la empresa se encontrará sometida a una norma de funcionamiento presupuestal.


2. Como dentro de los presupuestos están incluidos todos los planes, se evitan las pérdidas producidas al duplicar involuntariamente algún trabajo.


3. Permite hacer los cambios o ajustes que se consideren convenientes en los planes de la empresa en el transcurrir del tiempo contemplado en la vigencia de los presupuestos, para ponerlos a tono con las posibilidades financieras, antes de que sea demasiado tarde para hacer las modificaciones necesarias.


4. Cuando la empresa necesitare un préstamo bancario, puede resultar de mucha utilidad los presupuestos para que la entidad bancaria examine la marcha del negocio, aun cuando muchas veces no necesite apelar a este procedimiento.


5. Por medio del presupuesto financiero se evitarán las expansiones imprudentes.


6. Permite fiscalizar y controlar adecuadamente los gastos


7. Es el único procedimiento para calcular con la necesaria antelación el dinero efectivo que se necesitará para continuar con las actividades de la empresa.

Fuentes de capital circulante:

Las principales fuentes de Capital Circulante, son:

A. Fuentes de Capital Circulante a Largo Plazo:

1. Capital aportado por los socios
2. Préstamos a largo plazo.
3. Beneficios acumulados invertidos en créditos corrientes.
4. Venta de capital inmovilizado que no sea necesario para la marcha del negocio.

B. Fuentes de Capital Circulante a Corto Plazo:

1. Crédito comercial motivado por:
   
   a) Plazos autorizados por los proveedores
   b) Efectos por pagar
   c) Otras aceptaciones comerciales


2. Préstamos bancarios
   
   a) Sin garantía
   b) Con garantía


3. Aceptaciones bancarias


4. Venta de títulos en el mercado libre.

Fuentes del capital circulante a largo plazo:

Se debe evitar, en lo posible, estar a merced de las entidades bancarias por largo tiempo y en tal sentido se debe regularizar su utilización.

Si caer en manos de las entidades bancarias resulta ser un problema para el sano manejo de las finanzas de la empresa, que no decir de la situación de tener que recurrir a préstamos no regulados por el sistema financiero, que resultan altamente onerosos.

Las fuentes a largo plazo deben ser las que aporten la mayor parte del capital circulante, porque no conviene a ninguna clase de empresa estar mucho tiempo a merced de los préstamos bancarios u otras fuentes de difícil renovación y que en algún caso pueden fallar.

El desarrollo y/o crecimiento de la empresa en el tiempo, con una adecuada planeación, va a ir señalando las necesidades de inyección de capital y la mejor decisión será la relacionada a conseguir aportes adicionales de los socios o abrirse al mercado de participación y, como última opción, recurrir a las entidades bancarias.

También se suele caer en la equivocación de invertir en bienes inmovilizados no productivos, utilizando dinero en efectivo que pudiera servir de capital circulante, para finalmente tener que recurrir a los préstamos bancarios. Estos préstamos que, suelen ser a corto plazo, pueden generar dificultades para su pago en el momento de su vencimiento, si no está garantizado un adecuado flujo de caja, no comprometido, en otras acciones.

Otra fuente importante de capitalización, corresponde a la acumulación de beneficios. Lo que no se entregue como dividendos o participaciones, debe invertirse en el negocio, o mantenerlas como disponible, en inversiones a mediano o corto plazo, haciendo parte del capital circulante.

También puede ser aumentado el capital circulante vendiendo aquellos activos fijos que ya no se consideran necesarios para la marcha normal del negocio.

Fuentes de capital circulante a corto plazo:

Las necesidades de capital circulante a corto plazo en la mayoría de los casos está relacionado con el mayor volumen del negocio y disminuye cuando éste falta; esto da lugar a recurrir a préstamos bancarios o al mercado libre para procurarse el importe del aumento, mientras que en otros casos bastará con el crédito que nos conceda los proveedores con los que negocia la empresa.

Créditos comerciales que proveen de capital circulante:

Cuando el proveedor nos concede créditos al comprar la empresa materias primas o mercancías a crédito, nos estamos proveyendo de capital circulante. En ocasiones, ante compras inteligentes y sujetas a nuestra capacidad de ventas, cuando las facturas llegan a su vencimiento, la empresa ya cuenta con el dinero disponible para cancelarlas, sin la necesidad de tomar de su disponible, dinero alguno.

Préstamos bancarios como fuente de capital circulante:

No debe considerarse la obtención de recursos por parte de las entidades bancarias como capital circulante corriente, sino como especial, ya que los bancos no se hallan disponibles para suministrarnos el capital circulante regular para evitar las inmovilizaciones excesivas de las cantidades prestadas.

Cuando tengamos que recurrir a los préstamos bancarios, debemos tener la seguridad de que nuestras proyecciones de ventas y existencias de mercancías, son susceptibles de convertirse en efectivo al vencimiento de los préstamos. Hay que tener muy presente que del cumplimiento en el pago de las obligaciones bancarias, será una base importante para seguir contando con ellos, para el cubrimiento de nuestras necesidades a corto y largo plazo.

Capital circulante en el mercado de papeles comerciales:

El descuento de documentos al cobro entregadas a entidades financieras bien puede ser otra fuente de financiación a corto plazo. (Factoring).

No es frecuente el que la pequeña y mediana empresa recurra a este tipo de prácticas cuando en las transacciones con las entidades financieras pudieran estar involucrados sus proveedores, ya que temen reflejar una imagen de descapitalización y de generar desconfianza, con relación a la solidez económica de su cliente.

Sin embargo, no deja de ser una buena práctica cuando la empresa requiera de capital en el corto plazo y esta acción pudiera resultar menos onerosa y más rápida que el recurrir a la gestión de un crédito bancario.

Circunstancias que señalan la necesidad de capital circulante:

No existe regla fija y mucho menos mágica para determinar el capital circulante necesario en la empresa para un periodo dado, sin antes no entrar a analizar los diferentes factores que tienen injerencia en el comportamiento del efectivo.

Las necesidades de las empresas no son siempre las mismas y estas, están muy relacionadas a circunstancias intrínsecas o extrínsecas de cada una de ellas, en relación a su tipo o clase. Por tal razón deberán considerarse los siguientes factores en el establecimiento del capital de circulante.

1. Actividad de la Empresa relacionada con la demanda constante de sus productos o servicios


2. Comportamiento y recaudo de las cuentas por cobrar y deudores.


3. Renovación o giro de las existencias de almacén


4. Relación existente entre los plazos de compras y ventas


5. Carácter intermitente del negocio. Ventas por temporadas.


6. Ritmo normal del aumento del volumen del negocio.


7. Adecuadas relaciones de negocios con las entidades bancarias.

Ventajas de contar con suficiente capital circulante:

1. Seguridad y confianza en la administración y marcha de la empresa.


2. La solvencia o liquidez económica le ahorrará los inconvenientes que trae el "salir a conseguir" dinero para poder cubrir con nuestras obligaciones.


3. El poder hacer algunos pagos de contado en la compra de mercancías, aprovechando los descuentos, economizando los intereses de financiación y aumentando el margen de utilidad en las ventas efectuadas.


4. Aprovechar comprar en épocas en que el mercado es más favorable en precios.

Autor:
William Jiménez Lemus - wjlemusarrobagmail.com
Administrador de Empresas. Docente en las áreas de Administración general, Gestión Humana, Evaluación de Proyectos – Plan de Negocios, y Contabilidad. Implementación de estrategias para la motivación del personal. Asesor Pymes.
http://accorh-consultor-wjlemus.blogspot.com/

Ref: Gestiópolis

Panel de Evaluación Sensorial Análisis Sensorial en Alimentos Elizabeth H. Alarcón

Funcionamiento de un Panel de Evaluación Sensorial
Para el desarrollo y funcionamiento de un panel de evaluación sensorial es necesario tener en cuenta ciertos parámetros para conseguir resultados lo más objetivamente posibles.

Las condiciones para el desarrollo y aplicación de las diferentes pruebas sensoriales, son los jueces, los cuales deben ser seleccionados y entrenados, además es necesario proporcionar las condiciones locativas básicas, para la sala de catación o cabinas, para el sitio de preparación de las muestras.

También se tiene un especial cuidado en el momento de elegir la prueba que se va a aplicar, el formulario, el numero de muestras, las cantidades, los alimentos adicionales que van a servir de vehículo para ingerir la muestra, los recipientes que van a contener las muestras y la otra entre otras. Lo anterior brinda la seguridad y confiabilidad de los resultados, para posteriormente a través del estudio estadístico, lograr un análisis significativo permitiendo determinar la aceptabilidad esperada por el consumidor.

Los Panelistas
Tipos de Panelistas
Existen varios tipos de panelista de acuerdo al estudio que se este realizando:

1. panelistas expertos,
2. panelistas entrenados o panelistas de laboratorio
3. panelistas consumidores

Los dos primeros son empleados en el control de calidad en el desarrollo de nuevos productos o para cuando se realizan cambios en las formulaciones. El segundo grupo es empleado para determinar la reacción del consumidor hacia el producto alimenticio.

Los panelistas deben cumplir con algunos requerimientos, que son importantes para obtener excelentes resultados de acuerdo a los objetivos trazados, estos requisitos son:

• Asistir puntualmente a cada una de las sesiones de catación


• Debe tener una buena concentración y disposición, durante el desarrollo del panel
• Preferiblemente deben ser de ambos géneros (femenino y masculino)


• Los panelistas deben evitar el uso de alcohol y de alimentos con especias y el café


• Los panelistas en lo preferible deben ser no fumadores, y si lo son se recomienda que no hayan fumado por lo menos una hora antes del desarrollo de la prueba


• No deben estar fatigados y/o cansados


• No deben estar involucrados en el desarrollo del producto en estudio


• No se recomienda realizar las pruebas después de haber consumido alguna comida abundante o por el contrario sin haber probado bocado desde varias horas

Selección de Panelistas
Para la selección de los catadores, se tiene en cuenta algunas características que son fundamentales como: la habilidad, la disponibilidad, el interés y el desempeño.

• Habilidad: esta cualidad en un panelista es importante para poder diferenciar y reconocer en una o varias muestras, intensidad de sabores, olores, texturas, entre otros


• Disponibilidad: es necesario que las pruebas sean realizadas por todos los panelistas en el mismo momento y que le dediquen el tiempo necesario para cada prueba, que no tenga afanes por realizar otras actividades


• Interés: es importante que cada panelista demuestre interés en las pruebas que realizan, con el fin de obtener resultados confiables, para esto es necesario que el líder del panel motive a los catadores, para que ellos tengan un compromiso con la labor que están desarrollando


• Desempeño: esta característica es de vital importancia, ya que si en los resultados de las pruebas se encuentra que alguno de los panelistas, exagera al medir un atributo o por el contrario no lo detecta, es necesario sacarlo del grupo o para el ultimo caso, para que vuelva a adquirir la capacidad que tenia, mediante la alternación de periodos de descanso y periodos de pruebas intensivas, presentándoles nuevas muestras que permitan medir el atributo en cuestión, si no se consigue el objetivo se toma la decisión de dar de baja al panelista del grupo⁶

Entrenamiento de los Panelistas
Los panelistas o catadores deben tener un entrenamiento adecuado para responder de una manera adecuada cuando se le solicita su opinión sobre algún alimento en estudio.

El panelista que va a realizar alguna prueba sensorial, debe estar descansado, dispuesto y con la mente despejada.

Los panelista se eligen de un grupo grande, los cuales se van clasificando de acuerdo a las habilidades para diferenciar muestras, es importante que el
panelista que ha sido seleccionado, tenga una sensibilidad tal que al evaluar varias veces una muestra, los resultados obtenidos sean siempre los mismos.

Condiciones para la Prueba
Sitio de la Preparación y aplicación de la Prueba
El desarrollo de las pruebas se debe llevar acabo, en un lugar que cumpla con unas condiciones que favorezcan unos resultados eficientes, debe disponer de una infraestructura adecuada, poseer un instrumental y personal calificado.

Dentro del sitio de la evaluación sensorial deben existir dos áreas principalmente separadas una de la otra.

Área de preparación de la muestra
Este sitio debe estar separado de los cubículos o sala de prueba o catación, para evitar que los panelistas observen la preparación de las muestras. Figura 7

La sala de preparación de las muestras debe tener:

• un extractor de olores para evitar que lleguen al área de pruebas
• una mesa de trabajo o mesones en concreto
• una estufa
• un lavaplatos
• licuadora
• batidora
• procesadores de alimentos
• tablas de picado
• cuchillos

Y demás elementos necesarios para preparar y presentar las muestras a los panelistas como vajillas, cristalería de colores, bandejas, recipientes plásticos, etc.

Esta área debe tener un buen flujo de trabajo, los pisos, paredes y muebles deben ser de fácil mantenimiento.

Área para la realización de las pruebas o catación de las muestras
Debe cumplir con algunas especificaciones:

• Estar retirada de áreas de ruidos


• Debe ser un lugar tranquilo


• Tener una temperatura ambiente, debe estar entre 18-22 ºC


• Tener iluminación preferiblemente natural, la cual debe ser uniforme. Se recomienda lámparas con luz de color, para cada una de las cabinas, con el fin de eliminar diferencias de color entre las muestras


• Tener una buena ventilación libre de olores extraños


• Los colores de las paredes deben ser claros que no interfieran con el producto y que no canse al panelista

La sala esta dividida en dos secciones:

Cabinas individuales: amplias, conformadas por una mesa, una silla, una pileta (no es obligatorio además de que puede provocar malos olores), software para análisis estadístico sensorial (figura 8), una ventanilla para el suministro de las muestras y pileta o grifos. Figura 9

En el momento de la prueba cada catador debe tener: las muestras codificadas a evaluar, el formulario de prueba, un vaso con agua, vaso para escupir (si no hay grifos ni sifón), cubiertos, servilletas y demás elementos necesarios para el panel esto con el fin de interrumpir la concentración de los panelistas. Figura 10

El número mínimo de cabinas es tres, pero normalmente se ubican entre 5-10, como se observa en la Figura 7. Cuando los espacios son reducidos se emplean cabinas de prueba temporal portátiles figura 11.

Cada cabina debe tener un dispositivo que permita al panelista indicar alguna señal al organizador del panel, además debe estar marcada con un símbolo o un número, para ser identificada.

Sala para realizar estudios cualitativos de mercado (Fig, 12)
Esta debe poseer: una mesa, sillas, una mesa adicional para colocar las muestras, formularios y demás elementos necesarios para llevar acabo la prueba.


Este área se utiliza para realizar discusiones entre los panelistas, y para realizar el entrenamiento.

A la entrada de la sala debe haber un escritorio para el recibo de los formularios
diligenciados.

Muestras
Estas se preparan como ya se nombró, en un sitio adecuado para tal fin.

• Temperatura: por lo general las muestras deben presentar a la temperatura a la cual se consumen normalmente el alimento, como las frutas, verduras pasteles, galletas, etc. Los productos cocinados generalmente se calientan a 80 C, manteniéndolos en baño de maría a 57 ºC ± 1 ºC y los refrescos y bebidas que se consumen frías se sirven a 4-10 C, para evitar sabores desagradables lo cual puede afectar las respuestas de los panelistas⁷. Las bebidas y sopas calientes se sirven a 60-66 ºC⁸


• Tamaño: este parámetro depende de la cantidad de muestra que se tenga y del número de muestras que deba probar el panelista. Se recomienda que si el panelista tiene que probar demasiadas muestras estas deben tener un contenido bajo de producto a analizar, para evitar la sensación de llenura y malestar al panelista lo cual puede influir en el resultado.
  
  Las cantidades recomendadas son:⁹
• alimentos pequeños como dulces, chocolates, caramelos: la muestra
  debe ser una unidad
• alimentos grandes o a granel: 25 gramos
• alimentos líquidos como sopas o cremas: una cucharada equivalente a 15 mililitros o bebidas: muestras de 50 mililitros


• Número de muestras: se recomienda que en una misma sesión no se den más de cinco muestras al mismo tiempo a los panelistas, para evitar fatigas y llenura¹⁰. En el caso de panelistas expertos se hace una excepción.

Materiales para servir las muestras
El tipo de material depende de la muestra y de las pruebas elegidas, ya que algunas requieren de elementos esenciales.

1. Los recipientes que se utilizan en una misma sesión de catación deben ser iguales


2. Si se emplea cerámica o cristalería es necesario limpiar muy bien y con un papel absorbente (no se debe utilizar paños de tela, ya que trasmites olores a los recipientes), estos recipientes se deben emplear únicamente para realizar las pruebas


3. Los recipientes plásticos no deben reutilizarse, y no deben impartir algún olor o sabor adicional a la muestra que la enmascare


4. Los esferos que se utilicen para marcar las muestras no deben desprender olores o se debe dejar en reposo, antes de dar la muestra al catador

Horario de la prueba
Se recomienda realizar las pruebas una hora antes del almuerzo y dos horas después de este, en la mañana alrededor de las 11 – 12 m y en la tarde entre las 3-4 p.m.

Vehículos
Son sustancias que se emplean para colocar las muestras como las galletas o panes en el caso de evaluar mantequilla, quesos fundidos, mermeladas, pastas de carne o cualquier sustancia untable. En algunos casos no se recomienda el uso de estas sustancias ya que las características de estas pueden interferir con las de las características de las muestras. Estos productos cuando se utilizan deben ser insípidos.

Ver también: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7

IPv6 Vint Cerf explains the new Internet protocol

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Vint Cerf, Chief Internet Evangelist at Google, and a founding father of the Internet, discusses the next version of the Internet, IPv6, and why we need it.

When the Internet launched operationally in 1983, no one ever dreamed that there might be billions of devices and users trying to get online. But like a telephone network that is running out of phone numbers, the current Internet is running out of IP addresses, and if we don't roll out Internet Protocol v6 (IPv6), we won't have the room we need to grow and the Internet would become tangled, unsafe and unsustainable.

Fuente: Google

CASE IH - Cosechadora de Caña de Azúcar Colhedora CASE 8800

Fuente: Caseihagr | Gabriel Santos

Clases de Antibióticos Su determinación por LC/MS/MS en aguas con preparación en línea de la muestra

Introducción

Existe una creciente preocupación por la presencia de antibióticos en fuentes ambientales de agua. Esto ha hecho que laboratorios ambientales y gubernamentales desarrollen metodologías por LC-MS para monitorear estos compuestos en fuentes de provisión de agua.^1-4 Las muy bajas concentraciones de los antibióticos en estas matrices normalmente requieren un gran trabajo de pre-concentración y limpieza de la muestra. La preparación de las muestras de agua (100 a 1000 ml) antes del análisis LC/MS/MS lleva bastante tiempo reduciendo así la productividad (usualmente el número de muestras es alto).

Se describe aquí una metodología que reduce significantemente el tiempo de preparación de la muestra por uso de pre-concentración y extracción en línea acoplada a un detector triple cuadrupolo (TSQ Quantum de Thermo Scientific) operando en el modo de monitoreo de reacción de fragmentación altamente selectiva (H-SRM) para la determinación de antibióticos a muy bajos niveles de concentración (pg/ml).

Experimental
Los antibióticos ensayados (Tabla 1) fueron provistos por Sigma y utilizados sin purificación adicional. Las soluciones madre de los estándares de antibióticos (1,0 mg/ml) se prepararon en metanol y se almacenaron en viales de polipropileno color ámbar a -20 ºC. A las muestras de agua se les adicionó Na₂EDTA (2 µg/ml en H₂O) para inhibir la interacción de las tetraciclinas con las superficies de vidrio y los iones metálicos en solución.¹ El sistema en línea de Thermo Scientific para concentración/extracción (Aria TLX-2) se basa en la tecnología TurboFlow^® cuyo elemento clave es la columna. Volúmenes de 1 ml de muestras de agua fueron inyectadas sin preparación adicional de las mismas. Los antibióticos seleccionados fueron enfocados y, desde luego concentrados en la columna de extracción de flujo turbulento, para luego ser transferidos a la columna analítica. La separación se llevó a cabo con un gradiente de fase reversa previo a la detección con el TSQ Quantum en el modo de monitoreo de reacción de fragmentación altamente selectiva (H-SRM).

Extracción TurboFlow:

• Columnas TurboFlow: Cyclone® MAX 0,5 mm x 50 mm
• Volumen de inyección: 1 ml
• Flujo: 2,0 ml/min
• Fase móvil de las bombas de carga: A) bicarbonato de amonio 10 mM, B) ácido acético 0,5 % + ácido trifluoracético 0,04 %, C) acetonitrilo + ácido fórmico 0,1%

Cabe comentar que la tecnología basada en flujo turbulento utiliza columnas con partículas de gran tamaño (> 50µm), responsables de la turbulencia que se genera entre los espacios intersticiales. Por otro lado, es en los pequeños poros de estas partículas donde se produce la interacción física y química entre analitos y fase estacionaria. El proceso de "carga" se realiza en condiciones de optimizar la concentración de analitos en el interior de los poros de estas partículas mientras el flujo turbulento elimina moléculas grandes o con poca afinidad por la fase estacionaria. La etapa de "extracción" básicamente utiliza otra fase móvil que permite inyectar el "concentrado" en la columna analítica.

Cromatografía Líquida:

• Columnas analíticas: Thermo Scientific Hypersil GOLD 4,6 mm x 100 mm, 3µm
• Flujo: 1,2 ml/min
• Fase móvil de las bombas de elución: A) ácido acético 0,5 % + 0,04 % ácido trifluoracético; B) acetonitrilo + ácido acético 0,5 % + 0,04 % ácido trifluoracético
• División de flujo: post-columna, 0,5 ml/min a la sonda de electrospray

Espectrometría de Masa:

• Modo de ionización: electrospray positivo
• Temperatura del tubo de transferencia: 375 oC
• Presión del Q2: 1,5 mTorr de Argón
• Transiciones: se indican en la Tabla 1
• Tiempo de cada transición: 40 ms
• Resolución del Q1: 0,7 Da FWHM (unitaria) o 0,15 Da FWHM
• Resolución del Q3: 0,7 Da FWHM (unitaria)

Resultados y Discusión
Detalles del método empleado
Los 13 antibióticos ensayados (Tabla 1) fueron pre-concentrados en una columna de extracción TurboFlow de modo mixto Cyclone MAX que posee características de fase reversa y de intercambio aniónico. Luego de la inyección de la muestra utilizando un flujo en la columna TurboFlow de 2 ml/min para remover interferencias de la matriz (ver figura inicial), la válvula 1 se conmuta para permitir que el solvente de extracción (50% acetonitrilo + ácido fórmico 0,1%) transfiera los analitos a la columna analítica. El alto contenido orgánico del solvente de extracción se diluye por la fase móvil altamente acuosa de la bomba de elución a 1,2 ml/min. Este mezclado dinámico sucede antes de la columna analítica de modo que los antibióticos pueden reenfocarse antes de la etapa de separación por fase reversa. La columna TurboFlow es reacondicionada durante la adquisición de datos para la próxima inyección.

La adquisición de datos en el triple cuadrupolo, tanto en modo de transición de alta resolución (H-SRM) o unitaria (SRM) fue llevada a cabo en 5 segmentos monitoreando 8 transiciones en cada uno de ellos. El hecho de monitorear dos transiciones por antibiótico no sólo obedece a un propósito confirmatorio sino además en mejorar la estadística iónica. El empleo de alta resolución en el primer cuadrupolo aumenta tanto la selectividad como la sensibilidad de la metodología al disminuir el "ancho" del rango de masas que filtra este primer elemento (en resolución unitaria se permite que masas con diferencias de hasta 1 uma se transfieran a la celda de colisión).

En este trabajo se está utilizando el sistema Aria-TLX-2 en el que, a efectos de mayor productividad, se utilizan dos conjuntos de "extracción TurboFlow + cromatografía líquida" acoplados a un único detector triple cuadrupolo operando a través del software Aria que permite consolidar el sistema haciendo que las columnas analíticas eluyan al detector sólo durante la porción significativa de la corrida y permitiendo así la superposición de corridas. De este modo se consiguen realizar dos corridas en el tiempo que normalmente tardaría sólo una.

Sensibilidad y calibración:
La figura 2 presenta los cromatogramas de los estándares de los 13 antibióticos y la dehidroeritromicina en sus límites de cuantificación (entre 0,5 y 5 pg/ml) inyectando 1 ml de muestra. Las calibraciones se generaron desde los límites de cuantificación hasta 100 pg/ml para los 13 antibióticos en agua desionizada. 13 de los 11 antibióticos observaron curvas de calibración lineales (con ponderación 1/x, siendo x la concentración). Sulfametoxazol y sulfametizol dieron mejores resultados utilizando un ajuste cuadrático. En todos los casos: R² ≥ 0,990 (4 replicados).

Fortalecimiento de antibióticos en una muestra de agua de superficie:
La figura 3 muestra los resultados obtenidos para una muestra de agua de superficie fortalecida a nivel de 25 pg/ml con los estándares. Previo al fortalecimiento, la muestra de agua fue monitoreada utilizando el método descripto y se observó la no presencia de los antibióticos. La figura 4 muestra un ensayo comparativo con muestras puras de antibióticos a 25 pg/ml. Las sulfonamidas mostraron una menor supresión iónica mientras los macrólidos presentaron una señal levemente aumentada. Las tetraciclinas sin embargo mostraron una diferencia significante en la respuesta que podría atribuirse a la interacción de estos compuestos con metales residuales en el agua.

Monitoreo de antibióticos en muestras ambientales:
Se monitorearon antibióticos en muestras de aguas de superficie de distintos lugares de California, Florida y Ontario utilizando la metodología descripta. De todas ellas sólo la del Lago Ontario mostró un nivel significante (figura 5). Los insertos en la figura 5 muestran las trazas cromatográficas para las dos transiciones correspondientes a los antibióticos encontrados.

Conclusiones:
Se ha podido demostrar la utilidad de un método LC-MS/MS con limpieza y pre-concentración de la muestra en línea para la determinación de antibióticos en muestras de aguas a niveles de pg/ml. La capacidad de trabajar con grandes volúmenes (1 ml) por parte de la tecnología de extracción de flujo turbulento reduce significativamente el tiempo de análisis de horas a minutos. El uso de detección con un triple cuadrupolo de alta resolución capaz de llevar a cabo transiciones con alta selectividad, provee una clara ventaja en relación a la selectividad y confianza de análisis con respecto a los análisis realizados en condiciones de resolución unitaria (0,7 Da FWHM). Alta productividad no sólo se logra por el empleo de metodología de preparación de la muestra en línea sino además por el empleo de una configuración instrumental que permite acoplar dos sistemas cromatográficos a un mismo detector triple cuadrupolo.

Referencias:
1 Lindsey, M. E.; Meyer, M.; Thurman, E. M.; Anal.Chem., 2001, 73,4640-4646.
2 Yang, S.; Cha, J.; Carlson, K.; Rapid Commun. Mass Spectrom., 2004, 18, 2131-2145.
3 Gobel, A.; McArdell, C. S.; Suter, M. J.-F.; Giger, W.; Anal. Chem., 2004, 76, 4756-4764.
4 Shang, D.; Dyck, M.; Jia, X.; DiCicco, A.; Alleyne, C.; Nicolidakis, H.; Mori, B.; Proc. 48th ASMS Conf. on Mass Spectrom. And Allied Topics, TPH #264.

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