Pure Essential de BÜCHI Sistema de Cromatografía

Ideal para usuarios que dan sus primeros pasos en la cromatografía automatizada el Sistema de Cromatografía Pure Essential de BÜCHI se centra en los aspectos básicos de cualquier aplicación flash básica. Gracias al diseño del instrumento, su modularidad y su facilidad de uso, le resultará muy fácil empezar con la automatización y se beneficiará de una mayor velocidad y de infinitas posibilidades.

El Sistema de Cromatografía Pure Essential ofrece como ventajas un diseño y una configuración básicos. Es ideal como instrumento básico y para empezar con la automatización. Además del hardware, BÜCHI ha desarrollado un software que permite al usuario controlar de manera rápida y sencilla los parámetros más importantes de una ejecución. Se pueden conectar fácilmente y configurar automáticamente complementos como el detector UV o el colector de fracciones.

• El Sistema de Cromatografía Pure Essential ofrece como ventajas un diseño y una configuración básicos
• Gracias a las reducidas dimensiones del instrumento, se puede colocar incluso en laboratorios abarrotados, y su solidez lo hace altamente fiable
• Básico a la vez que potente gracias a una bomba de 50 bares, sensores de presión y reguladores

Crece conforme aumentan sus necesidades
Solución modular y ampliable

Siempre se empieza con lo mínimo. BÜCHI le proporciona asistencia en cada paso de su proceso de investigación y le ofrece la máxima flexibilidad en su paso de purificación. El Sistema de Cromatografía Pure C-900 acelera sus procesos de separación y aumenta la reproducibilidad. No obstante, en cualquier momento puede aumentar aún más la eficiencia de sus procesos de separación añadiendo un colector de fracciones y un detector UV para disfrutar de estas ventajas: recolección de fracciones activada por volumen o UV, supervisión de la eficiencia de los procesos de separación, detección de compuestos durante una ejecución y reducción de la evaporación de disolvente gracias a una recolección más precisa.

• Entre las posibilidades de ampliación se incluye la incorporación de un detector UV y un colector de fracciones al Sistema de Cromatografía Pure C-900
• No hay límites con respecto al tamaño de las fracciones recogidas
• Existen opciones adicionales que le permiten ser flexible con respecto a la carga de muestras (líquidas y sólidas) y el soporte para cartuchos (cualquier tamaño entre 4 – 5.000 g)

Fácil de usar
Cromatografía Plug and Play

Con los Sistemas de Cromatografía Pure Essential, las separaciones flash son más sencillas que nunca gracias a varias características clave del hardware y el software.
El Sistema de Cromatografía Pure Essential se puede instalar manualmente de manera sencilla, y tanto el colector de fracciones como el detector UV se configuran automáticamente. Gracias al innovador software de última generación, el sistema se puede controlar de manera intuitiva. Con solo unos clics, se puede programar un método o adaptar parámetros sobre la marcha.

• Navegación intuitiva proporcionada por un innovador software de última generación (métodos, datos de ejecuciones y ajustes generales)
• Se puede acceder fácilmente a todos los tubos y piezas del instrumento, que permiten al usuario supervisar y hacer un seguimiento del flujo del proceso
• La automatización simplifica todo el proceso de separación

Permite un funcionamiento seguro y eficiente y reduce cualquier preocupación por acontecimientos impredecibles
¿Por qué el Nuevo Sistema de Cromatografía Pure Essential de BÜCHI es ideal si me encuentro dando mis primeros pasos en Cromatografía?
El Sistema de Cromatografía Pure Essential se centra en los aspectos básicos de cualquier aplicación flash básica. Gracias al diseño del instrumento, su modularidad y su facilidad de uso, le resultará muy fácil empezar con la automatización y se beneficiará de una mayor velocidad y de infinitas posibilidades.

Tamaño compacto y solidez

Gracias a las reducidas dimensiones del Sistema de Cromatografía Pure Essential, se puede colocar incluso en laboratorios abarrotados. La bomba, que incluye el detector UV, se puede situar encima del colector de fracciones para ahorrar espacio. El dispositivo ofrece como ventajas una construcción de calidad sólida en general con cabezales de bomba de acero, racks del colector de fracciones extremadamente robustos y un resistente soporte para cartuchos. Está fabricado para resistir los rigores del uso diario.

Básico a la vez que potente y seguro
Aunque es básico, el Sistema de Cromatografía Pure Essential destaca por su potencia y seguridad. La bomba de 50 bares puede gestionar cualquier aplicación flash, con partículas de sílice grandes o pequeñas. Sus tres pistones garantizan un flujo sin pulsaciones que contribuye a una separación eficiente. El detector UV es muy sensible y permite detectar compuestos en concentraciones incluso más bajas. Además, el instrumento está equipado con un sensor de presión y es poco susceptible a los derrames gracias a su diseño inteligente.
Muchas separaciones flash solo requieren una configuración básica. Solo se necesita una bomba para agilizar el flujo de disolventes y muestras y, opcionalmente, un detector UV y un colector de fracciones.

Carga de muestras y recolección de fracciones sin límites
El Sistema de Cromatografía Pure Essential se adapta a sus necesidades.
El colector de fracciones es compatible con recipientes de diferentes tamaños y diseños: tubo, embudos y matraces. Además, el usuario puede elegir entre la carga de muestras líquidas o sólidas en función de la aplicación. Las muestras líquidas se pueden inyectar directamente mediante una válvula de inyección manual o mediante bucles o cámaras de muestras con capacidades de volumen entre 5 y 1.000 ml.

Se adapta a sus aplicaciones
Las aplicaciones pueden variar ampliamente en cuanto a escala y complejidad. Con el Sistema de Cromatografía Pure Essential, tendrá el equipo que necesita para cualquier aplicación. Puede conectar cualquier tipo de cartucho flash (con tamaños entre 4 y 5.000 g) o columnas de vidrio (con un diámetro interno de hasta 100 mm y longitudes de hasta 900 mm) en función de la cantidad de muestra que se vaya a purificar. Se puede instalar una cámara de mezclado a alta presión adicional (con tamaños entre 2,5 y 23 ml) para mezclar correctamente sus disolventes, especialmente cuando se usen en concentraciones bajas.

Opciones adicionales

La separación de una mezcla suele acabar con múltiples fracciones recogidas. La concentración de estas fracciones se puede llevar a cabo mediante el Rotavapor® de BÜCHI o mediante la tecnología Vortex de evaporación con el SyncorePlus de BÜCHI, que permite procesar varias muestras a la vez. El Sistema de Cromatografía Pure Essential es compatible con los mismos tubos de vidrio y racks del Rotavapor® y el SyncorePlus, lo que maximiza la eficiencia de sus procesos.
Siempre se empieza con lo mínimo. BÜCHI le proporciona asistencia en cada paso de su proceso de investigación y le ofrece la máxima flexibilidad en su paso de purificación.

Fácil acceso

Es necesario realizar tareas de solución de problemas y mantenimiento de vez en cuando al trabajar con sistemas de cromatografía. Por tanto, se puede acceder fácilmente a todos los tubos y piezas del Sistema de Cromatografía Pure, que permiten al usuario supervisar y hacer un seguimiento del flujo del proceso. Además, el detector UV está conectado externamente a la bomba para que la celda de flujo se pueda limpiar o sustituir fácilmente.

Automatización

La automatización simplifica todo el proceso de separación, ya que permite un funcionamiento seguro y eficiente y reduce cualquier preocupación por acontecimientos impredecibles. El software Pure Essential le guía paso a paso por el proceso de ejecución: cebado, equilibrado, carga de muestras, elución y enjuague. Por último, todos los datos de ejecuciones se guardan automáticamente y están disponibles en cualquier momento mediante informes detallados.

Mas información:

Análisis de un Anticuerpo Monoclonal por cromatografía de exclusión por tamaño (UPLC - SEC)

Introducción

Los anticuerpos monoclonales (mAb) se han convertido en una de las clases de proteínas predominantes en el campo bioterapéutico. Tanto el nivel como la valencia de agregación de las proteínas solubles son atributos de calidad críticos (CQA) que deben controlarse para las preparaciones de mAb destinados al uso humano. La agregación de proteínas - que puede ocurrir durante todo el proceso de fabricación a partir del cultivo celular o a través de la vida útil del producto farmacéutico - puede ser indicativo de la desnaturalización parcial u otras perturbaciones de la estructura de las proteínas que podrían afectar perjudicialmente a la seguridad y eficacia de la proteína bioterapéutica(1). Si bien es importante evaluar cuantitativamente los niveles de agregados de baja valencia (por ejemplo, dímeros) como una medida del proceso, estabilidad y seguridad del producto, también es crítica para dilucidar la distribución de agregados multiméricos de alta valencia solubles en preparaciones bioterapéuticas de proteínas. Estos agregados multiméricos pueden ser más eficaces en la provocación de una respuesta inmune, debido a su capacidad para activar una vía independiente de la participación inmunológica de células T(2).

La reciente incorporación de columnas de exclusión con un tamaño de poro de 450 Å, en partículas con un diámetro inferior a 3 µm, ha permitido ampliar el campo de separación de pesos moleculares por exclusión por tamaño (UPLC-SEC) para incluir macromoléculas biológicas con grandes radios de hidratación (Rh), tales como IgM y proteínas asociadas multiméricas(3).

En este estudio se evaluó un material de relleno constituido por partículas de 2,5 µm de diámetro y 450 Å de poro (BEH450) para el análisis de un mAb. Los datos demuestran las ventajas de la separación de exclusión por tamaño basada en la cromatografía liquida de Ultra Performance (UPLC) en comparación con la cromatografía liquida (HPLC) para la separación de complejos de proteínas macromoleculares y los beneficios de las columnas UPLC BEH SEC combinadas de 200 Å y 450 Å de poro para el análisis de una muestra de mAb que contiene agregados multiméricos de alta valencia.

EXPERIMENTAL
Descripción de las muestra

Todas las muestras se diluyeron en fase móvil a menos que se haya indicado lo contrario. Las proteínas fueron compradas como estándares individuales o como mezclas. La muestra mAb IgG1 es el biofármaco trastuzumab que se analizó pasada su fecha de vencimiento. Las concentraciones de la muestra fueron de 1,0 mg/ml (nominal).

Condiciones experimentales (a menos que se indique lo contrario)

Condiciones cromatográficas
Sistema:ACQUITY UPLC H-Class Bio con horno calefactor para columnas de 30 cm.
Detección: Detector ACQUITY UPLC TUV con celda de titanio de 5 mm de paso óptico
Detector Light scattering Wyatt miniDAWN TREOS
Longitud de onda: 280 o 214 nm
Columnas: ACQUITY UPLC PrST SEC, 450Å, 2.5 μm, 4.6 x 150 mm (p/n 176002996) y 4.6x 300 mm (p/n 176002997)
ACQUITY UPLC PrST SEC, 200Å, 1.7 μm, 4.6 x 150 mm (p/n 186005225) y 4.6x 300 mm (p/n 186005226)
Columna HPLC: Silica-based, diol bonded 450Å, 8 μm, 7.8 x 300 mm
Temperatura de la columna: Ambiente
Temperatura de la muestra:10 °C
Volumen de inyección: 5 μL
Caudal:0.35 mL/min
Fase móvil: Fosfato de sodio 5 mM, Cloruro de sodio 250 mM, pH 6.8 (preparado usando la tecnología Auto•Blend Plus)
Gradiente: Isocrático
Standard:BEH450 SEC Protein Standard Mix (p/n 186006842)
Software:Waters Empower® 3 Software
Waters UNIFI® Information System
Wyatt Astra Software

Detalles experimentales de Cross-linking
Los agregados covalentes de IgG de alto peso molecular se prepararon usando el estándar Waters® Intact mAb (p/n 186006552) y un reactivo de cross-linking específico de lisina BS3 (Pierce, Rockford, IL). Las reacciones se realizaron con el anticuerpo a una concentración final de 10 mg/ml y una relación molar reactivo a proteína de aproximadamente 5:1 durante 30 minutos.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Comparación de UPLC-SEC y HPLC-SEC de IgM y IgM dímero

Los resultados obtenidos con la columna de UPLC BEH450 son comparados con los obtenidos con una columna de HPLC con partículas de 8 µm base sílica en la separación de IgM, una inmunoglobulina pentámera con un peso molecular de 900 KDa y la forma di-pentámera de peso molecular 1.8 MDa (Figura 1). La cantidad de muestra inyectada y el caudal de trabajo son ajustados en base a la diferente geometría de las columnas usadas y ambos análisis son realizados en el mismo sistema cromatográfico Acquity UPLC H-Class Bio.

La columna BEH450 produjo una mejor separación significativa entre la forma di-pentámero y pentámera y una mejora de la sensibilidad con una altura de pico mayor en un 50% en comparación con la columna de HPLC. Esta notable mejora en la eficiencia de separación se debe principalmente a la disminución de tamaño de partícula. Además, se puede observar que el rango de resolución de pesos moleculares de la columna BEH450 se extiende por encima del dipentámero basado en la observación de las formas multiméricas del dímero de elución más temprana en el cromatograma.

Expansión del rango de pesos moleculares en el análisis de las agregaciones de mAb
La eficiencia excepcional proporcionada por la columna de la BEH450 para la separación de proteínas por encima del rango de peso molecular de la columna BEH200 (aproximadamente 450 kDa) sugiere que el uso de las dos columnas en serie puede proporcionar algunas ventajas para las separaciones UPLC-SEC a lo largo de un amplio intervalo de pesos moleculares. La comparación de la separación lograda con las columnas BEH200 y BEH450 solas (300 mm de longitud) y la versión de longitud de 150 mm de las dos columnas conectadas en serie (BEH200 seguida por BEH450) para la mezcla de proteínas estándar Waters® BEH200 SEC (p/N 186006518) se muestra en la Figura 2. Como la contrapresión generada por la columna de tamaño de partícula 1,7 µm BEH200 es mayor que la de la columna de tamaño de partícula 2,5 µm BEH450, la columna BEH200 se colocó primero en la serie para este estudio. El resultado de esta configuración de dos columnas se muestra en el panel central de la Figura 2.

Mediante el uso de dos columnas en serie se aumenta el rango de pesos moleculares superiores funcionales de la separación como se observa en la separación de la tiroglobulina y su dímero en comparación con la separación lograda usando una columna de 200Å sola. Además, para las formas de peso molecular inferior hay una mejora en la resolución en comparación con el uso de la columna de la 450Å solo tal como lo demuestra la separación mejorada entre IgG y BSA.

El uso de dos columnas SEC de diferente tamaño de poro puede proporcionar separaciones a través de un rango más amplio de pesos moleculares. Un ejemplo de tal separación es el agregado multivalente, trímero, dímero y las formas monoméricas de un anticuerpo monoclonal. Para demostrar esto fue procesada una muestra de IgG (P/N 186006552) para generar formas diméricas y multiméricas covalentes con el fin de obtener una muestra estable con un nivel abundante de especies multiméricas de un anticuerpo. Esta muestra se utilizó para definir el intervalo de peso molecular de las especies de mAb agregadas que pueden ser separadas por las columnas BEH200 y BEH450. La química de entrecruzamiento produce altos niveles de especies multiméricas que se caracterizan con facilidad por la medición de múltiples ángulos de dispersión de luz láser (MALS). Sin embargo, la polidispersidad de los picos incrementada debido a la naturaleza de la reacción de reticulación, también resulta de enlaces no cruzados del reactivo a las proteínas.

Los cromatogramas que se muestran en la Figura 3 junto con las asignaciones de picos basados ​​en los datos de MALS demuestran las ventajas de usar las columnas BEH200 y BEH450 en serie. Para la separación utilizando sólo la columna BEH200 se obtiene una excelente resolución entre el monómero y dímero pero cuando se compara con la separación observada en la columna BEH450, la distribución de las formas agregadas de mayor peso molecular eluyen cerca del trímero y del volumen de exclusión total de la columna. Mediante el uso de las dos columnas en serie (cromatograma central en la Figura 3), la distribución de formas agregadas más altas se puede observar, mientras que se consigue una mejor resolución entre el monómero y el dímero en comparación con el uso de la columna de la BEH450 sola.

A continuación se investigó el uso de las columnas BEH200 y BEH450 en serie para el análisis UPLC-SEC de un anticuerpo IgG1 bioterapéutico (trastuzumab). Con el fin de generar una muestra más relevante para este estudio, la muestra de trastuzumab se sometió a una serie de eventos de congelación - descongelación para aumentar los niveles de agregados no covalentes en la muestra. Los niveles de los agregados fueron evaluados utilizando la columna BEH200 (longitud 300 mm) y las columnas BEH200 y BEH450 en serie (longitud de 150 mm c/u). Estos resultados (Figura 4) muestran que el uso de las dos columnas en serie proporciona una distribución de las formas agregadas multiméricas donde se puede observar una mejor separación entre las especies agregadas diméricas y triméricas en comparación con la columna BEH200 sola. Por el contrario, el uso de la columna BEH200 sola proporciona una mejor separación de los fragmentos de mAb que resultan de la escisión en la región bisagra de la mAb(4).

Mediante la evaluación de la variación del perfil cromatográfico durante el transcurso del estudio de congelación-descongelación se puede observar visualmente para ambas configuraciones de columnas que el nivel general de trímero soluble y agregado multimérico está aumentando. Ambas configuraciones de columnas también proporcionan resultados comparables para la determinación de los niveles relativos de dímero, así como para la sumatoria del trímero y el agregado multímero (Figura 5). Esta comparación cuantitativa requiere considerar el trímero y las formas multiméricas en forma conjunta debido que cuando se usa la columna BEH200 sola no es posible una integración exacta. El uso de las columnas BEH200 y BEH450 en serie proporciona un beneficio significativo para esta aplicación en el que las formas de trímeros y tetrámeros están más resueltos en comparación con el uso de la columna BEH200 sola. Además, la distribución de formas agregadas mayores en valencia que trímero y tetrámero se puede controlar mejor.

Estos resultados son consistentes con los presentados previamente (Figura 2) que demuestran que el intervalo de peso molecular superior de la columna BEH200 para una proteína globular es aproximadamente la de la tiroglobulina (667 kDa), casi el peso molecular de la IgG tetrámero (600 KDa). Por comparación, el intervalo de peso molecular superior de la columna BEH450 es aproximadamente la de IgM di-pentámero (1,8 MDa) que es el peso molecular de una IgG 12-mer. Esta información adicional proporcionada por la columna BEH450 de tamaño de poro más grande puede ser beneficioso en la caracterización de una proteína bioterapéutica ya que además de el nivel de agregación de la proteína, la valencia de esa agregación puede alterar potencialmente la inmunogenicidad.

CONCLUSIONES
Tanto los niveles y la naturaleza de los agregados solubles son atributos de calidad críticos (CQA) para las preparaciones de proteínas bioterapéuticas. La introducción de la columna BEH450 SEC proporciona un rango de peso molecular superior extendido que mejora significativamente la resolución en comparación con una columna de exclusión por tamaño basada en HPLC de igual tamaño de poro.
El uso de la columna BEH450 en serie con la columna BEH200 proporciona un intervalo de peso molecular expandido que se puede utilizar para el análisis de agregados diméricos y multiméricos de un anticuerpo monoclonal con un importante incremento de la sensibilidad, la resolución y del rendimiento.

El uso conjunto de un sistema ACQUITY UPLC H-Class Bio y las columnas SEC BEH200 de 1,7 µm y BEH450 de 2,5 µm proporciona los siguientes beneficios:

• Mayor resolución y disminución de los tiempos de corrida en comparación con métodos tradicionales de cromatografía liquida de exclusión molecular
• Un amplio rango de pesos moleculares (aproximadamente 10 kDa a 1800 kDa)
• Posibilidad de observar la distribución de las formas agregadas mAb multivalentes, manteniendo una excelente resolución entre el agregado dimérico y las especies mAb monoméricas

Referencias
(1) Cromwell ME, Hilario E, Jacobson F. Protein aggregation and bioprocessing. AAPS J. 2006; 8:E572-9.
(2) Rosenberg AS. Effects of protein aggregates: an immunologic perspective. The AAPS Journal. 2006; 8:501-7.
(3) Koza S, Fountain KJ. Advances in Size Exclusion Chromatography for the Analysis of Macromolecular Proteins. Waters Application Note 720004618EN. 2013 February.
(4) Hong P, Koza S, Fountain KJ. Analysis of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled with Mass Spectrometry Under Non-Denaturing Conditions. Waters Application Note 720004254EN. 2012 March.

Para mayor información:
D´AMICO Sistemas S.A.
Distribuidor exclusivo Quantachrome Instruments en Argentina
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Tel.: (54 11) 4306-0920 (líneas rotativas)
ventas@damicosistemas.com
www.damicosistemas.com

Cutting UltiMetal Plus stainless steel capillary tubing

Fuente: Agilent Technologies

Fundamentals of GC Columns Agilent Chem

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Fuente: Agilent Technologies

Pesticides & Pollutants MRM Database Overview Gas Chromatography

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Overview of the pesticides and environmental pollutants MRM database. It introduces you to the content and layout of the database in excel format.

Fuente: Agilent Technologies

Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución HPLC

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Fuente: ValenicaUPV

The HPLC Advantage Analysis of Natural Products,Phenolic Compounds in Cocoa

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Fuente: HPLCSessions

Cromatografía Iónica Recientes Avances Instrumentales

La IC (cromatografía iónica) es un método analítico que permite la identificación y cuantificación de especies químicas con carga. Los avances instrumentales alcanzados en los últimos años han sido impactantes.

Una breve reseña histórica ubica sus orígenes a mediados del siglo pasado. Si bien el desarrollo de la cromatografía HPLC (cromatografía líquida de alta performance) ocurrió a finales de los años 60, en IC no se había logrado un método lo suficientemente sensible dado que la fase móvil es necesariamente un electrolito que también aporta a la señal del detector de conductividad. Este inconveniente se remedió en 1975 al desarrollar Dow Chemical Company la técnica de supresión de iones del eluyente. El área de cromatografía iónica cobró un fuerte impulso y de allí surgió DIONEX (Dow IONic EXchange). A partir de ese momento todas las sucesivas técnicas de supresión son patentes desarrolladas por Dionex.

A continuación mostraremos un diagrama general del sistema, luego un análisis más detallado de los componentes tecnológicamente más innovadores y finalmente tres aplicaciones.

En la figura 1 se muestra un esquema de los principales componentes del equipo.
La alimentación externa para la fase móvil es exclusivamente agua de baja conductividad (< 0,054 μSiemens/cm) que pasa por una trampa de iones de modo de asegurarnos que el detector sólo responda a los analitos presentes en la muestra. Luego, una bomba la impulsa a la cámara del EG (generador de eluyente) en donde se genera la FM (fase móvil) por migración iónica de cargas desde un reservorio; pasa por el desgasificador que elimina los gases liberados durante el proceso electrolítico y llega posteriormente al inyector. Allí ingresa la muestra al sistema y luego alcanza la entrada de la columna; a la salida de la misma la tenemos separada en sus analitos componentes.

Entonces pasa por el supresor el cual disminuye casi de un modo total la señal de la FM. Es en estas condiciones que los analitos de la muestra llegan al detector. La señal eléctrica es procesada generando picos cuyas áreas son proporcionales a su concentración. La FM que sale del detector es recirculada pasando en contracorriente por el supresor y seguidamente por la trampa de iones para proveerlos de agua en forma permanentemente, permitiendo que el proceso electrolítico en ambos compartimientos sea continuo.
En la figura 2 se muestra un esquema detallado del EG en este caso para análisis de cationes. Consta de un reservorio con venteo y un cátodo conteniendo una solución concentrada de electrolito, en este caso MSA (ácido metansulfónico) y una cámara de generación debajo del mismo y provista de un ánodo. Cargando en el software del equipo la concentración deseada en función del tiempo, desde el reservorio irán migrando a la cámara aniones metansulfonato que son reemplazados por oxhidrilos liberados por reducción en el cátodo. Simultáneamente en el ánodo que está en la cámara de generación ocurre la hemirreacción de oxidación con liberación de protones. Como resultado final se obtiene la FM y oxígeno disuelto, es por ello que la próxima etapa es la de desgasificación.

En la figura 3 se muestra un esquema de funcionamiento del supresor autorregenerante catiónico y en la figura 4 del aniónico. El flujo por el tubo interno corresponde al de la FM con conductividad muy elevada a la llegada al supresor, además de los iones que se quieren analizar.

Por el tubo concéntrico externo se encuentran a cada lado los electrodos y circula agua en contracorriente. El material que separa los flujos corresponde a membranas de permeabilidad selectiva. Por ejemplo para el caso aniónico, en el ánodo se liberan protones que atraviesan la membrana y neutralizan a los oxhidrilos de la FM y en simultáneo los sodios de esta fase atraviesan la membrana y reaccionan con los oxhidrilos liberados en el cátodo para dar el hidróxido. Como resultado final tendremos a la salida del supresor una FM compuesta por analitos en su forma química de mayor conductividad, es decir, ácidos diluidos en agua.

En la figura 5 se muestra un esquema de la trampa de aniones autorregenerante. Consiste en dos flujos cuyas corrientes circulan en el mismo sentido y separados por una membrana semipermeable. La FM circula a través de una resina intercambiadora de aniones limitada exteriormente por el cátodo en donde se liberan por electrólisis los oxhidrilos. Entonces, los otros aniones son desplazados y atraviesan la membrana intercambiadora llegando al otro flujo que procede del supresor. Allí reaccionan con los protones liberados en el ánodo y van al recipiente de deshechos.

Todos estos avances (la generación de eluyente, el supresor electrolítico autorregenerante y la trampa de iones de operación continua) permitieron obtener una mejora sustancial en la relación S/N (señal/ruido), mayor estabilidad en la línea de base, muy bajos límites de detección y alta reproducibilidad en las determinaciones.

En la figura 6 podemos ver algunas aplicaciones:

i) En el primer cromatograma se pueden observar los bajos límites de detección que se pueden alcanzar, del orden de las ppt (partes por trillón), en este caso para la detección de trazas de aniones en agua ultrapura. Para llegar a estos límites se tomó un gran volumen de muestra y los aniones se retienen en un cartucho concentrador; desorbiéndolos luego con un pequeño volumen de NaOH de concentración elevada.

ii) En el segundo cromatograma se muestra un intercambio aniónico de alta performance, con detector amperométrico pulsado provisto de electrodo de oro, para la detección de carbohidratos y derivados de bajo peso molecular.

iii) En el tercer cromatograma se muestra una separación de metales de transición por derivatización post-columna y la correspondiente detección en el espectro visible a 530 nm.

Estos ejemplos nos están demostrando la versatilidad en cuanto a la detección: UV-Vis, amperometría pulsada, también acoplamiento con MSD (detector de masa) y además la posibilidad de emplear sistemas de derivatizaciones on-line pre y post-columna y de preconcentración de muestras.

Por lo expuesto se observa que la cromatografía iónica, con los instrumentos disponibles actualmente en el mercado desde compañías especializadas como Dionex, se ha convertido en un método de análisis rápido, exacto, reproducible y de un amplio campo de aplicación.

Fuente DIONEX Corporation (USA)
Departamento de Aplicaciones de Bioesanco SA.



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